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血管标本获取和冻存前处理

作者:液氮罐 日期:2017/12/12 8:14:00 信息来源:http://www.tcyedanguan.com/

人体血管的供者来源分两类:一是有心跳脑死亡供者,二是无心跳尸体供者。要求供者无肝炎、艾滋病等传染性疾病,适宜年龄为12~50岁,小于12岁的供者血管口径太小而应用价值不大,大于50岁则血管弹性差,移植后血管破裂等并发症的发生率高。获取人体血管必须遵循伦理学和法律原则,要求征得捐献者及其家属的同意。
术者需有一定的器官、组织获取经验,在无菌条件下切取供体的主动脉、腔静脉、门静脉、髂血管、股血管等具有保存价值的血管,迅速转移到4℃无菌的Hank's液或PBS液中,将血管腔内的残余血液轻柔地冲洗干净,去除血管外的脂肪结缔组织,保留血管细小分支长度大于2mm,以便移植时妥善结扎。检查血管是否存在动脉硬化或钙化,判断可用性。全部操作过程要求轻柔、准确,避免对血管的过度牵拉,禁忌器械接触血管内膜。修整后测量并记录血管的直径、长度、管壁厚度等数据,然后将其转移至添加了抗生素的4℃培养液中,密封孵育24~48h,以减少细菌污染。抗生素配方是由Strickett等(1983年)提出的,成分为头孢西丁240mg/L,林可霉素120mg/L,多黏菌素B100mg/L,万古霉素50mg/L,处理后的血管无菌率可达94%。2007年Jashari等将配方中的头孢西丁祛除,抗菌效果未见明显差别。
经过抗菌处理的血管转移至无菌培养液中,再次测量相关数据,并拍照,录入数据库。在无菌条件下将血管分别置入含冻存液的深低温保存袋中予以封装。在封装前留取少量冻存液,培养检查是否被污染。然后将保存袋封装入铝箔隔离袋中,编号,程序降温仪降温、冻存。整个过程可以归纳为5个主要步骤:①获取、②修整、③测量、④孵育、⑤冻存。目前国内的血管库缺少统一、规范的纳入、排除标准,1998年欧洲组织库协会制定的标准和1993年比利时心血管同种异体移植物纳入标准值得借鉴。
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