转基因与非转基因细胞作为供体细胞进行体细胞核移植,两者之间克隆胚胎体外发育效率是否存在差异,当今的报道说法不一,这可能是由于不同类型的供体细胞、培养体系、筛选药物、培养时间、转基因片段大小以及转染方法等差异所造成。经高质量浓度G418处理后的核供体细胞进行核移植所获得的重构胚的融合率、卵裂率和囊胚率均显著低于对照组,而囊胚细胞数没有显著差异,这可能是细胞刚经历外界的刺激后马上进行核移植,G418对细胞仍然存在毒性而影响细胞生长及克隆胚胎的发育性能。后续应在细胞进行G418处理后,撤走药物继续培养传代,使药物的毒性作用降低,再进行核移植,可能结果更加客观。
研究发现经G418处理后的核供体细胞进行核移植,克隆胚胎体外发育效率显著下降。在制备转基因动物时,利用电转或脂质体方法进行转染会影响供体细胞膜,再加入G418进行筛选,会对细胞造成更大的损伤,从而影响转基因克隆胚胎体外发育效率。因此,进行转基因细胞系阳性克隆筛选时可考虑降低G418的质量浓度,或者利用套环法或刮除法结合有限稀释法,减少对供体细胞的伤害,这可能有利于转基因克隆胚胎的发育。
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